بهینه سازی شرایط کشت باکتری اشرشیا کولی برای اصلاح تولید قطعه c-d نوترکیب باکتریورودوپسین

نویسندگان

سیروان خوانچه زر خوانچه زر

سمیره هاشمی نجف آبادی

جعفر محمدیان موسی آبادی

رسول خلیل زاده

سمانه اسفندیار

چکیده

در بررسی حاضر، بخش cdاز پروتئین باکتریورودوپسین (br) در اشرشیاکولی نوترکیب بیان شد. ژن موتانت brبا در نظر گرفتن کدون مورد استفاده در اشرشیاکولی ساخته شد. ژن ساخته شده در پلاسمید بیانی pet21a+ در محل ­های برش nde i وhind iii کلون شده و تحت کنترل پیش­بر t7 با موفقیت بیان شد. پروتئین بیان شده با sds page تجزیه شد. اثر دما (a)، زمان القا (b)و زمان فرایند پس از القا (c) روی بازده ی میزان بیان پروتئین ( میزان فراورده بر واحد جرم خشک سلول) با استفاده از تجزیه ­های جدول yates غربال گری شد. سه عامل a ، b و c مهم بودند و با روش تاگوچی بهینه شدند. شرایط بهینه عبارتند از: دما oc 37، زمان القا در 7/0od600= و زمان فرایند پس از القا 4 ساعت. همچنین، تولید پیش­ بینی شده پروتئین در شرایط بهینه، 54 /21%  از کل پروتئین سلولی بود. با استفاده از شرایط بهینه به دست آمده، تأثیر افزودن اسیدهای آمینه روی میزان بیان بخش cd و ترکیب باکتریورودوپسین و رشد باکتری در اشرشیاکولی با استفاده از محیط کشت m9 مورد بررسی قرار گرفت. تجزیه و تحلیل جدول yatesنشان داد که اسیدهای آمینه آلانین، ترئونین و لیوسین دارای اثر بیشتری روی بیان پروتئین بودند و برای افزودن به محیط کشت در فرمانتور در دو سطح گوناگون انتخاب شدند. نتیجه­ ها نشان دادند که افزودن اسیدهای آمینه باعث افزایش بازده ی تولید پروتئین مورد نظر می­  شود، اما تأثیر ناچیزی روی رشد باکتری دارد.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

بهینه سازی شرایط کشت باکتری اشرشیا کولی برای اصلاح تولید قطعه C-D نوترکیب باکتریورودوپسین

در بررسی حاضر، بخش CDاز پروتئین باکتریورودوپسین (BR) در اشرشیاکولی نوترکیب بیان شد. ژن موتانت BRبا در نظر گرفتن کدون مورد استفاده در اشرشیاکولی ساخته شد. ژن ساخته شده در پلاسمید بیانی pET21a+ در محل ‌های برش Nde I وHind III کلون شده و تحت کنترل پیش‌بر T7</em...

متن کامل

بهینه سازی شرایط کشت باکتری متعهد bl۲۱ جهت تولید پروتئین نوترکیب pep

پس از گذر از تحقیقات ژنومی و وجود انبوهی از اطلاعات در بانک های ژنومی اینک دوران تحقیقات در زمینه پساژنومی و شناخت محصولات ژنها، چگونگی ارتباطات آنها با یکدیگر و شناخت مسیرهای داخل سلولی با ابزار توانمند پروتئومیکس است. هدف از این بررسی بهینه سازی شرایط لازم جهت تولید پروتئین نوترکیب پراکسیزومی موشی (pep) در سویه مناسب و مستعد شده از اشرشیاکلی به نام bl21 میباشد. پروتئین نوترکیب pepدر مراحل بعد...

متن کامل

بهینه سازی ترکیب شیمیایی محیط کشت سلولی معین برای تولید ایمونوتوکسین نوترکیب اونتاک

زمینه و اهداف: ایمونوتوکسین یک پروتئین سمی است که به عنوان یک ترکیب نوین برای درمان سرطان پیشنهاد شده است. اونتاک یک ایمونوتوکسین نوترکیب می باشد که از توکسین دیفتری هیبرید شده با اینترلوکین2 تشکیل شده است. در این مطالعه بهینه سازی ترکیب محیط کشت معین بمنظور بیان اونتاک بررسی شده است. مواد و روش کار: در این تحقیق از باکتری سویه BL21(DE3) ترانسفورم شده با پلاسمید نوترکیب PET-IDZ  جهت بیان اونتاک...

متن کامل

افزایش تحمل به علف کش گلایفوسیت در نتیجه بیان ژن نوترکیب گلایفوسیت اکسیدورداکتاز (gox) در باکتری اشرشیا کولی

متحمل‌سازی گیاهان زراعی نسبت به علف‌کش گلایفوسیت از طریق دست‌ورزی‌های ژنتیکی یکی از کاراترین روش‌های موجود در مدیریت علف‌های هرز محسوب می‌شود. راه حل مطلوب برای توسعه گیاهان متحمل در سطح تجاری، به کارگیری ژن‌های عامل آنزیم های تجزیه کننده گلایفوسیت نظیر گلایفوسیت اکسیدورداکتاز در کنار EPSPS مقاوم به گلیفوسیت می‌باشد. ژن گلایفوسیت اکسیدورداکتاز اولین بار از باکتری Ochrobactrum antrophi سویه LBAA...

متن کامل

بهینه سازی تولید آنزیم استرپتوکیناز نوترکیب در باکتری اشریشا کلی

زمینه و هدف: استرپتوکیناز از جمله پروتئین های ترشحی استرپتوکک پیوژن است. این پروتئین در بیماریزایی باکتری نقش مهمی دارد. در این تحقیق سعی بر تولید بالای این آنزیم به شکل نو ترکیب بوده به طوری که محصول با تغییر ترکیب محیط کشت و تعداد باکتری القاء شده افزایش یابد. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، با استفاده ازروش pcr، ژن استرپتوکیناز از استرپتوکوک پیوژن تکثیر گردید. پس از تخلیص، ژن در ناقل پلا...

متن کامل

همسانه‌سازی مولکولی و بیان ژن سوماتومدین C در سیستم باکتریایی

سیستم­ های باکتریایی، به ویژه باکتری اشرشیا کولی، با توجه به مزیت هایی از قبیل هزینه پایین، سهولت کشت و سرعت رشد بالا به عنوان­­ اصلی­ ترین سیستم بیان پروتئین ­های دارویی نوترکیب به شمار می ­روند. در این پژوهش، از این سیستم برای بیان ژن سوماتومدین C به عنوان یک فاکتور ارزشمند رشد انسانی استفاده شد. cDNA این ژن پس از تهیه و تکثیر، با استفاده از آنزیم ­های برشی NdeI و BamHI داخل ناقل بیانی همسانه...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید


عنوان ژورنال:
نشریه شیمی و مهندسی شیمی ایران

ناشر: جهاد دانشگاهی- پژوهشکده توسعه صنایع شیمیایی ایران

ISSN 1022-7768

دوره 32

شماره 2 2013

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023